色谱,,39(7):-

DOI:10./SP.J...

沈洁,沈炜,蔡雪,王京霞,郑敏霞*

紫草油有效成分的高效液相色谱测定法及其在超临界流体萃取制备紫草油中的应用

摘要：

紫草提取制备成的紫草油能够预防及治疗婴儿尿布疹、皮肤溃烂、湿疹等多种皮肤疾患,临床应用非常广泛,超临界流体萃取是紫草有效成分提取的优选方法。该文建立了紫草油有效成分的高效液相色谱(HPLC)测定方法,并以紫草油所含的有效成分含量为评价指标,采用三因素三水平正交试验法对紫草超临界流体萃取制备过程中的几个重要因素(萃取压力、萃取温度和CO2流量)进行考察,确定了紫草超临界流体萃取的最佳工艺流程。所建立的HPLC方法如下:DiamonsilC18色谱柱(mm×4.6mm,5μm),流动相为含0.1%甲酸的乙腈-含5mmol/L甲酸铵的0.1%甲酸水溶液(75∶25,v/v),等度洗脱,流速为1mL/min;进样量为15μL;柱温为室温;二极管阵列检测器(PAD)检测波长为nm。该法可在30min内同时测定紫草油中的有效成分紫草素、乙酰紫草素、β-乙酰氧基异戊酰阿卡宁、异丁酰紫草素、β,β-二甲基丙烯酰紫草素和2-甲基丁酰基紫草素的含量,方法精密度、准确度、重复性好。在萃取压力23MPa、萃取温度40℃、CO2流量27L/h这一优化工艺流程下得到的紫草油有效成分含量最高。所建立的HPLC-PAD法简便可行、准确可靠,可用于超临界流体萃取制备紫草油的工艺过程优化和质量控制,也可为紫草及其制剂的质量评价提供参考。优化后的工艺条件能够满足紫草油制备需求,也符合生产实际需求。

紫草是皮肤科常用的中药之一,具有凉血、活血、解毒透疹的功效。《本草纲目》记载:“紫草治斑疹、痘毒,活血凉血,利大肠”,用于血热毒盛、斑疹紫黑、麻疹不透、湿疹、水火烫伤等。由紫草提取制备成的紫草油能够预防及治疗婴儿尿布疹、皮肤溃烂、湿疹等多种皮肤疾患,临床应用非常广泛。

紫草主要的活性成分是萘醌类化合物,包括紫草素(shikonin)、乙酰紫草素(acetylshikonin)、β,β-二甲基丙烯酰紫草素(β,β-dimethylacrylshikonin)等成分,传统的提取紫草有效成分的方法主要包括有机溶剂萃取法、水蒸气蒸馏法、减压蒸馏法、油浸法等,其工艺复杂,产品纯度不高,常用的有机溶剂提取法提取物中常含有微量有机溶剂残留。

超临界流体萃取(supercriticalfluidextraction,SFE)是近几十年发展起来的一种新型提取技术,对许多物质有较好的渗透性和较强的溶解能力,且萃取物无溶剂残留,保证产品%的纯天然性。

本研究建立了紫草油6种有效成分含量检测的分析方法,并以紫草油所含的有效成分含量为评价指标,优化紫草超临界流体萃取制备过程中的萃取压力、萃取温度和CO2流量3个制备工艺条件,确定了紫草超临界流体萃取的最佳工艺流程,从而保证有效成分含量的稳定性和紫草油质量的可靠性,达到安全、有效用药的目的。

DiamonsilC18色谱柱(mm×4.6mm,5μm),流动相:含0.1%甲酸的乙腈-含5mmol/L甲酸铵的0.1%甲酸水溶液(75:25,v/v),等度洗脱,流速为1mL/min;进样量为15μL;柱温为室温;检测波长为nm。

取紫草超临界流体萃取所得的样品1mg,精密称定,溶于1mL乙腈-水(75:25,v/v)溶液中,超声1min,用0.45μm滤膜过滤,滤液作为供试品溶液,供分析用。

选取新疆紫草,碾碎,粗粉碎物料过筛。紫草装料量g,CO2超临界流体萃取时间2h,无夹带剂,一级分离,萃取压力23MPa,萃取温度40℃,CO2流量27L/h。

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